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        FUJIFILM wako | NK 細胞抑制劑 Anti Asialo GM1(Anti AsGM1)

        NK細胞抑制劑                                                                                                                                                   wako

        Anti Asialo GM1(Anti AsGM1)



        糖脂神經節苷脂GM1(ASGM1)在感染病毒時的T細胞及自然殺傷(NK)細胞中表達。ASGM1局部存在于NK和CD8(+)細胞的脂筏結構中,抗Asialo- GM1抗體可降低在各種小鼠、大鼠中的NK細胞活性。

        接種抗Asialo-GM1抗體至實驗動物,去除NK細胞,用于NK細胞的功能分析或移植其他物種來源的腫瘤組織至小鼠體內1)2)。

        ASGM1也在嗜堿性細胞中表達,有報告稱,抗Asia-GM1抗體也可用于去除嗜堿性細胞3)。


        ■ 參考文獻


        1)

        Kasai M., Iwamori M., Nagai Y., Okumura K., and Tada T. : J. Immunol., 10, 175 (1980).

        2)

        Habu S., Fukui H., Shimamura M., Kasai M., Nagai Y., Okumura K., and Tamaoki N. : J. Immunol., 127, 34 (1981).

        3)

        Hideto, N., Kaori, M., Yohei, K., Yoshiyuki, M., and Hajime K., .: J. Immunol., 186, 10, 5766(2011)



        原理介紹


           Anti Asialo-GM1(Rabbit)抗血清可以減少大鼠或者小鼠來源的自然殺傷細胞(NK 細胞)的活性。該抗體可以與 NK 細胞發生特異性結合,從而抑制 NK 細胞非特異性殺傷靶細胞的活性。NK 細胞是一種免疫監視細胞,其靶細胞包括腫瘤細胞、同種異體移植的器官、組織等??蛇\用于藥物篩選,器官移植,自身免疫疾病等研究。

          每個產品有具體的體內外的滴定數據。



        ◆特點


        ● 已經體內NK細胞活性驗證

        ● 眾多文獻應用案例


         特性

         抗Asialo-GM1抗體、凍干品

         免疫方法

         牛腦組織純化的Asialo-GM1甲基化BSA(bovine   serum albumin),與FCA(Freund’s complete adjuvant)

         同時對兔免疫。

         純化方法

         50%硫酸銨鹽化后,使用含有磷酸緩沖液(pH=7.2)的生理鹽水透析。

         特異性

         與小鼠、大鼠的NK細胞以及小鼠胚胎胸腺細胞反應。

         復溶

         請在1 mL蒸餾水中復溶。建議使用磷酸緩沖液(pH 7.2)進行稀釋。

         接種方法

         一只小鼠靜脈注射10~50 μL。



        ◆注射方法


        小鼠-靜脈注射:

        10-50 μL(推薦 20 μL)具體劑量由滴度和規格而定。第一次注射在4天內有效,因此兩周內需要注射3-4次。

        大鼠-靜脈注射:

        50-250 μL(小鼠劑量的4或5倍)具體劑量還須考慮大鼠的健康狀況、體重和 NK 活性。

        小鼠和大鼠-腹腔給藥:

        同等劑量或多于靜脈注射。


        產品信息


         

        制備:

         

        從牛腦組織里提純的 Asialo-GM1 與甲基化牛血清白蛋白和弗氏完全佐劑一起使用,可進行反復免疫。用含有磷酸緩沖鹽水(ph7.2)的 50% 硫酸銨透析后,得到血清里的丙種球蛋白(Gammaglobulin)片段。

        內容:

        含有唾液酸抗體 GM1 的兔血清 50% 硫酸銨鹽析分層物(含蛋白量約 10 mg/mL)。

        提純法:

        50% 的硫酸銨鹽析后 ,用含有磷酸緩沖液的生理鹽水透析,然后凍干。

        特異性:

        作用于小鼠和大鼠的自然殺傷細胞;小鼠單核細胞(是一種不含自然殺傷細胞、骨髓、胎兒肝細胞和裸鼠脾臟巨噬細胞的肝細胞);小鼠胎兒胸腺細胞(12日齡;生存率不斷降低直到沒有出現新生小鼠)(備注:如果濃度高,也能作用于成熟的T淋巴細胞)

        免疫球蛋白類型:

        IgG、IgA 和 IgM

        重組:

        建議用蒸餾水(1 mL)。由于該產品是使用鹽來進行凍干的,如果用其它溶劑如 PBS 或 MEM,就能增加其鹽濃度。

        抗體滴度:

        通過免疫凝聚實驗得出結果,抗體滴度比例約 1 : 1,000

        保存方法:

        存儲在2~10℃下

        包裝規格:

        1mL樣瓶

        形狀:

        干凍品


        014-09801(986-10001)

         

         欲了解詳情請看相關資料


        應用案例

         

         適用的動物模型

         運用

         腫瘤動物模型

         與抗腫瘤藥物混合后注入腫瘤動物模型內,研究抗腫瘤藥物的作用機理。

         肝纖維化動物模型

         與治療肝纖維化的藥物混合后注入動物模型體內,研究抗肝纖維化藥物的作用機理。

         器官移植動物模型

         器官移植后,會產生免疫排斥反應,機體內的免疫監視會清除”異己“的細胞和器官。

         可用于研究器官移植后使用的免疫抑制劑的作用機理

         自身免疫疾病動物模型

         研究治療自身免疫疾病藥物的作用機理。

         干細胞動物模型

         抑制 NK 細胞的活性,從而有利于干細胞動物模型的建立。

         糖尿病動物模型

         研究炎癥與糖尿病的關系。



        ◆抗Asialo-GM1抗體體外活性


        向抗Asialo-GM1抗體中添加豚鼠來源補體,并在BALB/c小鼠的胰腺細胞中進行處理。通過靶向YAC-1細胞(●)體外檢測NK活性。

        效應子/靶標的比率為50:1,○表示補體處理后BALB/c小鼠胰腺細胞的NK活性。

        ※ BALB/c小鼠經聚(I:C)鈉鹽100 μg(0.2 mL的500 μg/ mL)處理后,正常飼養18小時后開始下一步操作。



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        ◆抗Asialo GM1抗體體內活性


        向BALB/c小鼠腹腔內注射抗Asialo-GM1抗體,并檢測單次給藥(效應子/靶標= 50:1)3天后收集的胰腺細胞對YAC-1細胞的腫瘤溶解度。

        ※ BALB/c小鼠經聚(I:C)鈉鹽100 μg(0.2 mL的500 μg/ mL)處理后,正常飼養18小時后開始下一步操作。



        ■ 對照:正常兔血清


        腹腔注射量

        腫瘤溶解度(%)

        100 μL

        70.8



        ■ 抗Asialo-GM1抗體


        腹腔注射量

        腫瘤溶解度(%)

        10 μL

        7

        25 μL

        8.4

        50 μL

        2

        100 μL

        0




        ※ 本頁面產品僅供研究用,研究以外不可使用。

        產品編號產品名稱產品規格產品等級
        014-09801(986-10001)Anti asialo GM1 (Rabbit) 
        NK細胞抑制劑
        1 mLfor Immunochemistry


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        了解應用案例


        Anti Asialo GM1的抗血清可以與NK細胞(自然殺傷細胞)結合,抑制NK細胞非特異性殺傷靶細胞的活性。靶細胞包括腫瘤細胞,同種異體移植的器官、組織等??捎糜谒幬锖Y選、器官移植、自身免疫疾病研究等。NK細胞屬于天然免疫細胞,具有免疫監視功能。

         

          特異性:小鼠、大鼠的NK細胞,小鼠單核細胞(不含有NK細胞的肝臟細胞,骨髓,胎兒肝臟細胞,裸鼠巨噬細胞的脾細胞),胎兒T淋巴細胞(12天)。

         


        ◆研究糖尿病的免疫治療


          據報道,抗細胞凋亡細胞因子IL-15具有促進NK細胞和T細胞(包括調節性T細胞,Tregs)存活和激活上述兩種細胞活性的功能。在患有糖尿病的NOD小鼠體內反復注射IL-15。如果每天一次,注射2周,既不抑制也不加速未處理NOD小鼠患糖尿病的情況。但是NK細胞活性喪失的NOD小鼠注射IL-15可以明顯減少糖尿病的發病率和延遲糖尿病發病時間,但是NK細胞活性喪失不注射IL-15的小鼠依然病發糖尿病。在用IL-15處理,NK細胞活性喪失的NOD小鼠體內產生的保護效應與CD4+CD25+ Tregs免疫抑制活性增加有關。在該項實驗中,用Anti AsGM1注射小鼠,抑制NK細胞活性,導致NOD小鼠NK細胞活性缺失。

        參考文獻:Jinxing Xia et al., Clinica l Immunology.(2010) 134, 130–139 <全文>

         


        ◆研究敗血癥中NK細胞的功能


          NK細胞和NKT細胞都屬于天然免疫系統,但在細菌引起的敗血癥中這兩種細胞的作用是有爭議。用Anti Asialo GM1處理小鼠,成為NK細胞活性抑制的小鼠;用CD1d單抗處理小鼠,成為NKT細胞活性抑制的小鼠;同時用同型對照單抗處理小鼠,作為陰性對照。之后這些小鼠感染肺炎鏈球菌。分析血清和組織樣品中細菌的含量,細胞因子,脾細胞凋亡率、用流式鑒定細胞,同時也分析脾細胞miRNA的表達。結果發現NK細胞活性抑制的小鼠延長了存活率。一旦NKT細胞激活抑制,與其他細胞群相比,脾臟的NK (CD3?/NK1.1+)細胞數目增加。NKT細胞活性抑制導致小鼠體內的細菌含量升高,導致血清和脾細胞IFN-γ水平升高??笴D1d處理小鼠的脾細胞miRNA分析顯示miR-200C和miR-29a下調,miR-125a-5p上調。這些變化發生在NK細胞活性抑制后。NK細胞可能與肺炎球菌肺炎的死亡率有關。抑制NKT細胞的激活導致(CD3?/NK1.1+)細胞數目增加,IFN-γ水平升高,改變脾細胞miRNA表達。

        參考文獻:Eirini Christaki et al., Journal of Immunology Research, Volume 2015 (2015),Article 

             ID 532717, 10 pages <全文>



        ◆研究自身免疫性疾病的NK細胞功能


          NK細胞是先天免疫淋巴細胞,在先天免疫和適應性免疫中均起著關鍵性作用。它在小鼠體內通過NK細胞消耗 Abs,特別是抗唾液酸GM1 (ASGM1),起關鍵作用。此次研究中,我們通過整個嗜堿性粒細胞群體組成如表達NK細胞群一樣,來表達ASGM1以及CD49b(DX5),并通過抗ASGM1在體內通過嗜堿性粒細胞消耗的抗FcεRIαAb有效地消融??笰SGM1介導的嗜堿性粒細胞的消耗與各種小鼠品系的NK細胞消耗有關,與NK1同種異型和MHC H2單體型(包括C57BL/6,BALB/c,C3H和小鼠A/J)無關。這些結果將嗜堿性粒細胞定義為以前未被認識到的抗ASGM1介導細胞消耗的靶標,并引起人們對嗜堿性粒細胞的關注,而不是NK細胞或除了NK細胞外對抗ASGM1處理的小鼠中觀察到的某些表型。

        參考文獻:Nishikado H, Mukai K, Kawano Y, et al. NK cell-depletinganti-asialo GM1 antibody exhibits 

             a lethal off-target effect on basophils invivo[J]. The Journal of Immunology, 

             2011, 186(10): 5766-5771<全文>



        ◆研究腫瘤的免疫治療


          腫瘤的發展過程包括血管新生,腫瘤尺寸增大和腫瘤轉移。使用CXCL14/BRAK (CXCL14) 轉基因小鼠研究過度表達的CXC趨化因子配體14 (CXCL14) 在上述生物學現象中的作用。與野生型小鼠相比,轉基因小鼠經AOM/DSS誘導的結腸血管新生的發病率顯著低很多。腫瘤細胞注射到這些小鼠后,腫瘤尺寸發生變化。與野生型的相比,轉基因小鼠肺中轉移小瘤的數目明顯少,腫瘤的尺寸也明顯變小。在注射腫瘤前后注射Anti Asialo GM1減少了CXCL14在腫瘤生長方面和腫瘤轉移的抑制效應,表明激活的NK細胞在CXCL14介導的抑制腫瘤生長和轉移期間起重要作用。CXCL14也表達在B16黑色素瘤細胞內表明NK細胞在腫瘤轉移方面的重要性。而且轉基因小鼠在注射腫瘤細胞后的存活率顯著增長。這些轉基因小鼠沒有明顯的不正常,預計腫瘤抑制/預防方面CXCL14起著重要作用。

        參考文獻:Hata R et al.,Scientific Reports(2015) 5 : 9083 | DOI: 10.1038/srep09083 <全文>

          


        動物模型

        運用

        腫瘤動物模型

        與抗腫瘤藥物混合后注入腫瘤動物模型體內,研究抗腫瘤藥物是否通過激活NK細胞活性達到殺傷腫瘤細胞的作用。

        肝病動物模型

        與治療肝病的藥物混合后注入動物模型體內,研究藥物是否通過激活NK細胞活性達到治療肝病的效果。

        器官移植動物模型

        器官移植后會發生免疫排斥反應,機體內的免疫監視系統會清除:異己“的細胞和器官??捎糜谘芯科鞴僖浦埠竺庖咭种苿┑淖饔脵C理。

        自身免疫疾病動物模型

        研究治療自身免疫疾病藥物的作用機理。

        干細胞動物模型

        移植NK細胞活性,有利于干細胞動物模型的建立。




        參考文獻

        [1]

        Nishikado H, Mukai K, Kawano Y, et al. NK cell-depletinganti-asialo GM1 antibody exhibits a lethal off-target effect on basophils invivo[J]. The Journal of Immunology, 2011, 186(10): 5766-5771.


        [2]

        Kasai, M., Iwamori, M., Nagai, Y., Okumura, K. and Tada, T.: Eur. J. Immunol., 10, 175 (1980)


        [3]

        Habu, S., Fukui, H., Shimamura, M., Kasai, M., Nagai, Y., Okumura, K. and Tamaoki, N.: Immunol., 127, 34 (1981)


        [4]

        Jinxing Xia et al., Clinica l Immunology.(2010) 134, 130–139.


        [5]

        Eirini Christaki et al., Journal of Immunology Research, Volume 2015 (2015), Article ID 532717, 10 pages.


        [6]

        Hata R et al.,Scientific Reports(2015) 5 : 9083 | DOI: 10.1038/srep09083


        [7]

        Ivanova, D. L., Denton, S. L., & Gigley, J. (2019). Anti-Asialo GM1 treatment during secondary Toxoplasma gondii infection is lethal and depletes T cells. bioRxiv, 550608.


        [8]

        Sung, C. C., Horng, J. H., Siao, S. H., Chyuan, I. T., Tsai, H. F., Chen, P. J., & Hsu, P. N. (2020). Asialo GM1-positive liver-resident CD8 T cells that express CD44 and LFA-1 are essential for immune clearance of hepatitis B virus. Cellular & Molecular Immunology, 1-11.


        [9]

        Fujii, Y., Gerdol, M., Kawsar, S. M., Hasan, I., Spazzali, F., Yoshida, T., ... & Sugawara, S.

        (2019). A GM1b/asialo‐GM1 oligosaccharide‐binding R‐type lectin from purplish bifurcate mussels Mytilisepta virgata and its effect on MAP kinases. The FEBS journal.


        [10]

        Kikuchi, N., Ye, J., Hirakawa, J., & Kawashima, H. (2019). Forced expression of CXCL10

        prevents liver metastasis of colon carcinoma cells by the recruitment of natural killer cells. Biological and Pharmaceutical Bulletin, 42(1), 57-65. 


        [11]

        Jones, N. M., Yang, H., Zhang, Q., Morales-Tirado, V. M., & Grossniklaus, H. E. (2019). Natural killer cells and pigment epithelial-derived factor control the infiltrative and nodular growth of hepatic metastases in an Orthotopic murine model of ocular melanoma. BMC cancer, 19(1), 484. 


        [12]

        Vandenhaute, J., Avau, A., Filtjens, J., Malengier-Devlies, B., Imbrechts, M., Van den Berghe, N., ...& Wouters, C. (2019). Regulatory Role for NK Cells in a Mouse Model of Systemic Juvenile Idiopathic Arthritis. The Journal of Immunology, 203(12), 3339-3348.


        [13]

        Junqueira-Kipnis, A. P., Trentini, M. M., Marques Neto, L. M., & Kipnis, A. (2020). Live

        Vaccines Have Different NK Cells and Neutrophils Requirements for the Development of a Protective Immune Response Against Tuberculosis. Frontiers in Immunology, 11, 741. 


        [14]

        Murer, P., Kiefer, J. D., Plüss, L., Matasci, M., Blümich, S. L., Stringhini, M., & Neri, D. (2019). Targeted delivery of TNF potentiates the antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity of an anti-melanoma immunoglobulin. Journal of Investigative Dermatology, 139(6), 1339-1348.


        [15]

        Turaj, A. H., Dahal, L. N., Beers, S. A., Cragg, M. S., & Lim, S. H. (2017). TLR-3/9 Agonists

        Synergize with Anti-ErbB2 mAb. Cancer research, 77(12), 3376-3378.


        [16]

        Sorski, L., Melamed, R., Matzner, P., Lavon, H., Shaashua, L., Rosenne, E., & Ben-Eliyahu, S. (2016). Reducing liver metastases of colon cancer in the context of extensive and minor surgeries through β-adrenoceptors blockade and COX2 inhibition. Brain, behavior, and immunity, 58, 91-98.



        ◆其他文獻


        本公司的抗Asialo-GM1抗體在以下為代表的各種文獻中均有應用案例。


        1. 

        Hudson, W. A., Li, Q., Le, C., and Kersey, J. H., : Leukemia12, 2029 (1998).


        2. 

        Murphy W. J., Durum S. K., Longo D. L., : PNAS, 89, 10, 4481 (1992).


        3. 

        Bentzmann S., Roger P., Dupuit F., Bajolet-Laudinat O., Fuchey C., Plotkowski C. M., Puchelle E. : Infection and immunity64, 5, 1582 (1996).


        4. 

        Nishikado H., Mukai K., Kawano Y., Minegishi Y., Karasuyama H. : J. Immunol., 186, 10, 5766(2011).


        5. 

        Victorino, F., Sojka, K. D., Brodsky, S. K. McNamee, N. E., Masterson, C. J., Homann, D., Yokoyama, M. W., Eltzschig, K. H., Clambey, T. E., : J. Immunol., 195, 10, 4973(2015).


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